时间：2021/12/4 16:09:08

T7转录酶法RNA制备试剂盒
说明:本试剂盒用于体外转录产生带有FITC或Cy3或Cy5等修饰RNA探针，获得的RNA探针适合原位杂交，Northern blot杂交，RNA蛋白相互作用。可以适当渗入FITC/Cy3/Cy5/DIG/Bio等，标记效率已优化。修饰后的RNA探针可通过光谱仪检测。
组成
Cat. No    Product Name             Size    Number    Store
    T7 RNA 聚合酶Buffer（10X）  50ul    1    -20℃
    T7 RNA聚合酶                50ul    1    -20℃
    NTP Mix（Cy5）               200ul    1    -20℃
    DNA质控模板                 5ul    1    -20℃
    RNase Inhibitor                25ul    1    -20℃
    无核酸酶水                 1ml    1    -20℃

DNA模板获得:
DNA模板可以是质粒DNA、寡核苷酸退火双链、PCR产物或cDNA等等。
DNA模板必须是线性的，包含转录起始位点的T7 RNA聚合酶启动子序列。

实验操作:
（1）模板准备：
1）添加T7 启动子序列，引物扩增目的基因片段（我公司可以提供）。
2）寡核苷酸退火提供PCR片段（我公司可以提供）。
3）cDNA合成的制备的模板。
4）务必将需要带有T7启动子序列引入的基因组序列。

（2）戴好手套，口罩，冰上操作，按以下顺序配制反应混合液；
10×Buffer    2ul
NTP Mix（Cy5）    8ul
DNA模板    0.2-1ug
RNase Inhibitor    1ul
T7 RNA聚合酶    2ul
无核酸酶水    Xul,Add to 20ul
Total    20ul

（3）用枪头轻轻混匀，在37°C条件下孵育1-2小时；对小短片段，需要孵育4小时；
（4）胶回收纯化合成的RNA、或乙醇沉淀纯化的RNA，可凝胶电泳检测转录产物；
（5）荧光效率标记和浓度可以通过光谱仪或核酸检测仪。